Hot-Start Taq DNA Polymerase

      Hot-Start Taq DNA Polymerase是一種僅當(dāng)溫度高于45℃時(shí)才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase(簡稱Taq酶)與其可逆抑制劑的混合物，俗稱熱啟動(dòng)Taq酶或HS Taq酶。使用本產(chǎn)品進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)可以在室溫操作，并能有效避免室溫操作時(shí)由于普通Taq酶或其它耐熱DNA聚合酶存在活性而導(dǎo)致的非特異性PCR背景。
      Hot-Start Taq DNA Polymerase是Taq酶與其可逆性抑制劑的混合物。該抑制劑可以可逆性地結(jié)合于Taq酶活性位點(diǎn)，當(dāng)溫度低于45℃時(shí)，形成非活性的Taq酶和抑制劑的復(fù)合物，從而抑制了Taq酶的活性。在常規(guī)PCR反應(yīng)過程中，當(dāng)溫度升高至45℃或以上時(shí)，Taq酶和其可逆性抑制劑解離，從而發(fā)揮其正常的DNA聚合酶活性。上述機(jī)制使Hot-Start Taq DNA 
Polymerase僅在加熱到45℃或以上時(shí)才會(huì)有酶活性，從而確保了小于45℃時(shí)不會(huì)發(fā)生非特異性的DNA聚合反應(yīng)，有效降低了PCR的非特異性背景，提高了PCR反應(yīng)的準(zhǔn)確性和**性。
      常規(guī)的DNA分離純化操作，例如PCR純化試劑盒或DNA凝膠回收試劑盒和乙醇沉淀等操作，都能有效去除本產(chǎn)品中的抑制劑，以避免可能的對于后續(xù)反應(yīng)的干擾。
      Hot-Start Taq DNA Polymerase使用時(shí)無需額外的高溫孵育步驟以釋放Taq酶活性。
      Hot-Start Taq DNA Polymerase和普通的Taq DNA Polymerase一樣，可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的DNA的聚合反應(yīng)，沒有3'至5'的外切酶活性，*終會(huì)導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的3'末端產(chǎn)生3'-dA overhangs，即產(chǎn)生帶一個(gè)A的3'粘端，可直接用于TA克隆。

       圖1. Hot-Start Taq DNA Polymerase的酶活力測定。A. Hot-Start Taq DNA Polymerase (HS Taq)在40℃時(shí)，其聚合酶活力完全被抑制。以M13 mp18 ssDNA (7249nt，電泳顯示約2.2kb)為模板，添加適量引物后40℃孵育10min，1% Agarose凝膠電泳。圖中可見普通Taq酶在40℃可以發(fā)生聚合反應(yīng)，使DNA條帶延長至電泳呈現(xiàn)的約3.5kb大小，而Hot-Start Taq酶(HS Taq)完全不能使M13 mp18 ssDNA的鏈發(fā)生延長，即其酶活力完全被抑制。B. Hot-Start Taq DNA Polymerase在常規(guī)PCR條件下其活力完全被釋放，PCR擴(kuò)增效果和Taq酶完全一致。

      來源：本產(chǎn)品使用的Taq DNA Polymerase為recombinant Taq DNA Polymerase，通過大腸桿菌表達(dá)純化獲得，和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。
      用途：高背景和有非特異性條帶的PCR，高專一性PCR(high-specificity PCR)，高靈敏度PCR，生物芯片分析(microarray
analysis)，常規(guī)PCR，克隆PCR、TA克隆等，不建議用于熒光定量PCR (qPCR)。
      活性定義：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl₂, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [³H]dTTP。
      純度：不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，滿足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。
      酶儲(chǔ)存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
      10X Hot-Start PCR Buffer：100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl₂, 0.8% (v/v) Nonidet
P40。
      失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Hot-Start Taq DNA Polymerase失活，加入脫氧膽酸鈉至0.06%，SDS至0.01%，或
sarkosyl至0.02%均可以抑制Hot-Start Taq DNA Polymerase。
      本產(chǎn)品用于50微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于4000個(gè)反應(yīng)；用于20微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于10000個(gè)反應(yīng)。
包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存。
注意事項(xiàng)： 
      由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴(kuò)增目的基因序列超過1000萬倍，在使用Hot-Start Taq Polymerase時(shí)請注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。
      Hot-Start Taq DNA Polymerase在PCR過程中每循環(huán)的出錯(cuò)幾率約為2.2×10^-5，對于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯(cuò)幾率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA Polymerase、BeyoTaq DNA Polymerase等。對于普通的PCR或RT-PCR定性檢測或定量檢測，Hot-Start Taq DNA Polymerase是*佳選擇。
      本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的**和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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