大觀霉素試劑盒
產(chǎn)品介紹
【簡介】
大觀霉素為鏈霉菌所產(chǎn)生的一種氨基環(huán)醇類***，是一新型特效專治淋病的***。大觀霉素阻止**細胞壁蛋白質(zhì)的合成并能阻礙已合成蛋白質(zhì)的釋放，具有強大的抑菌**作用。
本試劑盒是應(yīng)用ELISA 技術(shù)研發(fā)的新一代**殘留檢測產(chǎn)品，與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點, 操作時間僅需45 分鐘，能*大限度地減少操作誤差和工作強度。
大觀霉素試劑盒【原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中殘留的大觀霉素和酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗大觀霉素抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含殘留物大觀霉素的含量成負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中大觀霉素的殘留量。
【適用范圍】
可定性、定量檢測動物組織（雞肉、雞肝、豬肉、豬肝、魚、蝦等）牛奶、蜂蜜樣本中大觀霉素的殘留量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度：0.2ppb
檢測時間： 45min
樣本檢測下限：
組 織 …………………………………………………8ppb
蜂蜜………………………………………………… 8ppb
牛奶………………………………………………… 8ppb
大觀霉素試劑盒樣本回收率：
組 織 ……………………………… …… 85% ±15%
蜂 蜜、牛奶……………………………… 80% ±20%
交叉反應(yīng)率 ：
大觀霉素………………………………………………100%
新霉素……………………………………………小于0.1%
鏈霉素……………………………………………小于0.1%
慶大霉素…………………………………………小于0.1%
安普霉素…………………………………………小于0.1%
卡那霉素…………………………………………小于0.1%
【試劑盒組成】
1． 微量測試孔：每條8孔，一板12條
2． 標(biāo) 準(zhǔn) 液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、0.2ppb、0.6pb、 1.8ppb、5.4ppb、16.2ppb
3． 高濃度標(biāo)準(zhǔn)液×1瓶：（1ml/瓶）1ppm
4． 酶標(biāo)記物 7ml ……………………… 紅色帽
5． 抗體工作液 7ml ……………………… 綠色帽
6． 底物A液 7ml …………………………白色帽
7． 底物B液 7 ml …………………………黑色帽
8． 終止液 7 ml …..…………………… 黃色帽
9． 20X濃縮洗滌液40 ml ………………… 透明帽
10． 2X濃縮復(fù)溶液 50 ml ………………… 藍色帽
大觀霉素試劑盒【所用儀器、試劑】
儀 器：微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮氣吹干裝置、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道 20μl～200μl、100μl～1000μl、多道 250μl
試 劑：甲醇
【實驗前溶液配制】
配液1、樣品提取液：70%甲醇溶液30ml蒸餾水或去離子水和70ml純甲醇混合制備70％甲醇溶液。
配液2、將5X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1：4稀釋（1 份濃縮復(fù)溶液+4份去離子水）用于樣本的復(fù)溶。
配液3、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
【樣本前處理步驟】
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
u 樣本處理：
（a）組織樣本前處理方法
1、 稱取1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于離心管中，加入4ml樣品提取液，振蕩5min，室溫4000r/min 以上，離心10min；
2、 取1ml上清液收集于另一試管中;加入1ml 正己烷,振蕩1min，室溫4000r/min 以上，離心10min；
3、 取50 μl下層液體于另一容器中，加入450μl樣本稀釋液混合30s；
4、 取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 40 倍
（b）蜂蜜處理方法
1、 準(zhǔn)確稱取1±0.05g 蜂蜜樣本于離心管中，加入 4ml 樣品提取液，強烈混合振蕩5min，室溫4000r/min以上，離心10min；
2、 取出50μl 上清液于另一試管中，加入450μl樣本稀釋液混合30s；
3、 取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 40 倍
（c）牛奶樣品處理方法
脫脂牛奶
1、取出50μl 脫脂牛奶于另一試管中，加入1950μl樣本稀釋液混30s；
2、取50 μl 用于分析
脂肪奶
3、確吸取1ml 牛奶樣本于離心管中；于15℃環(huán)境3000r/min，離心10min；（如果沒有冷凍離心機請預(yù)先冷卻后再離心)
4、取出50μl 牛奶于另一試管中，加入1950μl樣本稀釋液，混合30s；
5、取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 40 倍
【酶標(biāo)**分析程序】
大觀霉素試劑盒操作步驟：
1、 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻
2、 按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl /孔，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反
應(yīng)30min。
5、 取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、 顯色：每孔加入底物液A液50μl再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。
7、 測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測在5min內(nèi)讀完數(shù)
據(jù)），測定吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與大觀霉素的含量成負相關(guān)。
1、粗略判定
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng /ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.221，樣本2的吸光度值為0.795，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.81；0.2ppb為1.50；0.6ppb為1.114；1.8ppb為0.660； 5.4ppb為0.318；16.2ppb為0.145。則樣本1的濃度范圍是5.4ppb-16.2ppb；樣本2的濃度范圍是0.6ppb-1.8ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中大觀霉素實際含量。
1、 定量分析
（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即：
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以大觀霉素濃度（ng /ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中大觀霉素實際含量。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索?。?b>
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：
B/B0 (%)
0.2 0.6 1.8 5.4 16.2
(ppb) [μg/kg]
圖1：大觀霉素檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
0 0.2 0.6 1.8 5.4 16.2
(ppb) [μg/kg]
圖2：大觀霉素檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出大觀霉素檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)大觀霉素濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行
下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。