氯霉素試劑盒
產品介紹
【產品簡介】
氯霉素是一種廣譜***，具有很好的**效果，常用于畜牧業(yè)生產中，然而，氯霉素會造人的再生障礙性貧血，而且誘發(fā)濃度還沒有確定，所以目前已經禁止在動物及食品中使用氯霉素。
氯霉素快速檢測試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點，適用于大批量樣品快速檢測。
氯霉素試劑盒【測定原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物氯霉素和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氯霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應殘留物氯霉素的含量。
【試劑盒技術指標】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.05ppb
檢測時間： 45min
樣本檢測下限：
水產品、動物組織……………………… 0.05ppb
蜂蜜……………………………………… 0.05ppb
參考標準GB/T 20756-2006 檢測下限為0.1ppb
樣本回收率：
組織…………………………………………90%±15%
蜂蜜…………………………………………85%±15%
交叉反應率
氯霉素……………………………………………… 100%
甲砜霉素…………………………………………… < 0.1%
氟甲砜霉素…………………………………………< 0.1%
氯霉素試劑盒【試劑盒組成】
1、 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、 標準液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb
3、 酶標記物 7ml………………………紅色帽
4、 抗體工作液 7ml…………………… 綠色帽
5、 底物 A 液 7ml…………………… 棕色帽
6、 底物 B 液 7 ml…………………… 黑色帽
7、 終 止 液 7 ml…………………… 黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液 40ml………………白色帽
9、 2X濃縮復溶液 50ml………………藍色帽
具備的儀器：微孔酶標儀、打印機、均質器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道250μl
試 劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、磷酸氫二鉀、濃HCl
【實驗前溶液配制】
配液1、將2X濃縮復溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復溶液+1份去離子水）用于樣本的復溶。
配液2、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照 1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
配液3、 0.1MK2HPO4 稱11.4g K2HPO4·3H2O加去離子水溶解定容至500ml。
配液4、1M HCl溶液取8.6ml濃HCl加去離子水定溶至100ml。
配液5、1M NaOH溶液取4gNaOH加去離子水定容至100ml。
氯霉素試劑盒【樣本前處理方法】
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產組織。eg:雞、鴨、豬、牛、羊、兔、魚、蝦等。
（b）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實驗前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
樣本前處理步驟：
樣本的處理方法：
（a）水產、組織、蜂蜜 (單一做氯霉素檢測時使用的前處理方法）
1、 用均質器均質組織樣本；
2、 稱3±0.05g樣本于離心管中，先加入3ml去離子水充分混勻再加入6ml乙酸乙酯，振蕩5min，室溫4000r/min以上，離心10min；
3、 取出4ml上層液體在氮氣流50-60℃水浴中干燥；
4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml稀釋后的復溶液強烈振蕩混合30s，室溫4000r/min以上離心5min。
5、 取50 μl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：0.5
(b) 水產、組織、蜂蜜(氯霉素和硝基呋喃類四項檢測時使用的五合一前處理方法）
1、 取2±0.05g均質樣本樣本，加入 4ml的去離子水，0.5ml1M HCl和100μl衍生化試劑，充分振蕩。
2、 置于37℃恒溫箱孵育過夜（大約16h）或56℃水浴中孵育2h；
3、 分別加入5ml 0.1M K2HPO4， 0.4 ml 1M NaOH和5ml乙酸乙酯，充分振蕩2min；
4、 在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。
5、 取出2.5ml的乙酸乙酯到另一潔凈容器中于50℃氮氣/空氣吹干。
6、 用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀釋好的復溶液充分混合30s；在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。
7、 取50μl下層用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1
(備注：使用該五合一前處理方法檢測氯霉素，因存在一定的干擾；樣本檢測下限為0.3ppb）。
氯霉素試劑盒【酶標**分析程序】
1、 從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出需要數(shù)量的微孔及框架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標準品/樣本 50μl/孔到各自的微孔中，加入酶標記物50μl/孔,然后加入抗體50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕震蕩混勻。25℃環(huán)境中反應30min。
5、 取出將孔內液體甩干，用洗液250μl/孔洗板4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、 顯色：每孔加入底物A液50μl，再加底物B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
7、 測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內讀完數(shù)據），測定每孔OD值。
【結果判定】
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含氯霉素成反比。
1、 粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設樣本1的吸光度值為0.250，樣本2的吸光度值為0.720，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.610；0.05ppb為1.380；0.15ppb為1.100；0.45ppb為0.620；1.35ppb為0.289；4.05ppb為0.108。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb-4.05ppb； 樣本2的濃度范圍是0.15 ppb-0.45 ppb。乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實際濃度。
2、 定量分析：
（1）百分吸光率計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以氯霉素標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索?。?
3、標準曲線：
B/B0 (%)
0.05 0.15 0.45 1.35 4.05
CAP(ppb) [μg/kg]
圖1： 氯霉素檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
CAP (ppb) [μg/kg]
圖2：氯霉素檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結果確定了精密度，圖2顯示出氯霉素檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應氯霉素濃度作曲線，可以看到在全部范圍內變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【 注意事項】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質。
8、 該試劑盒*佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產日期、有效期、生產批號見外包裝。