甲醛-生理鹽水固定液技術(shù)服務(wù)
一、實驗原理
類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。首先待擴增DNA模板加熱變性解鏈,隨之將反應(yīng)混合物冷卻至某一溫度,這一溫度可使引物與它的靶序列發(fā)生退火,再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。甲醛-生理鹽水固定液這種熱變性-復(fù)性-延伸的過程就是一個PCR循環(huán),PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。
二、實驗步驟
PCR擴增
甲醛-生理鹽水固定液根據(jù)客戶的實驗?zāi)康?,進行PCR反應(yīng)的優(yōu)化。
1、變性:高溫使雙鏈DNA解離形成單鏈(94℃,30s)。
2、退火:低溫下,引物與模板DNA互補區(qū)結(jié)合(55℃,30s)。
3、延伸:中溫延伸。DNA聚合酶催化以引物為起始點的DNA鏈延伸反應(yīng)(70~72℃,30~60s)。
甲醛-生理鹽水固定液以上述三個步驟為一個循環(huán),每一循環(huán)的產(chǎn)物均可作為下一個循環(huán)的模板,經(jīng)過n次循環(huán)后,目的DNA以2n的形式增加。
三、樣品準(zhǔn)備
1、模板制備
客戶提供PCR所需模板(質(zhì)粒、基因組DNA、PCR產(chǎn)物等),或者提供樣品,我們制備模板。
2、引物設(shè)計
甲醛-生理鹽水固定液客戶提供上、下游引物,或者提供目的基因的相關(guān)信息(基因序列、Genebank accession number擴增產(chǎn)物的用途等),我公司提供免費的引物設(shè)計及合成。