單克隆抗體中建立ELISA方法的注意事項

如何利用ELISA篩選以及ELISA方法操作的注意事項，下面我先起個頭吧，談談我的個人經(jīng)驗：）

ELISA，全稱酶聯(lián)**吸附實驗，主要利用的是抗原抗體特異性結合的特點，可分為直接法、間接法、雙抗體夾心法、競爭法等。下面以間接法為例進行介紹：

1、方陣ELISA。用途：①融合前后確定鼠血清中抗體效價；②拿到單抗腹水后，需要建立ELISA方法時首先要確定包被原及抗體的*佳工作濃度。

經(jīng)典的方陣ELISA：將抗原和抗體各自稀釋成不同梯度濃度，結果OD值P/N>2的均判為陽性，選取OD值在1.0左右的那個Ag-Ab濃度為*佳工作濃度，其主要原因與酶標儀靈敏度有關。

但是，對于抗原抗體而言，由于它們被稀釋成不同濃度，那么在理論上，每個抗原稀釋度情況下，總有一個抗體的稀釋度其OD值在1.0左右，那么到底選取哪一個OD值1.0左右的好呢？這就需要同時用**做個抑制來看，哪個濃度下抑制情況好，就取哪個抗原抗體濃度做工作濃度。